Penggunaan dan langkah berjaga-jaga tiub emparan ultraturasan
1) Pilih tiub ultraturasan yang sesuai.Perhatikan bahawa membran UF berbeza dalam tahap toleransinya terhadap pelbagai bahan kimia.Lazimnya, tiub ultraturasan dengan pemotongan berat molekul 10 kDa boleh dipilih dengan pemotongan berat molekul yang tidak boleh melebihi 1/3 daripada berat molekul protein yang diminati, seperti 35 kDa.Jika berat molekul protein yang diminati adalah sekitar 10 kd, tiub ultraturasan dengan potongan berat molekul 3 KD boleh digunakan.
(2) Penapisan ultra, yang baru dibeli, adalah kering, dengan air ultratulen ditambah sebelum digunakan dan air sepenuhnya melalui membran, mandi ais atau peti sejuk yang telah disejukkan selama beberapa minit.Air itu kemudian dituangkan, iaitu cecair protein, dan berapa banyak yang ditambah, yang mana tidak lebih daripada garis putih di bahagian atas tiub.Operasinya ringan, dan tiub ultrafiltrasi perlu disejukkan terlebih dahulu pada ais sebelum menambah larutan protein.
3) Kedua-dua jisim dan pusat graviti harus mencapai keseimbangan.Perhatikan kelajuan putaran dan pecutan tidak begitu pantas, jika tidak secara langsung merosakkan membran ultraturasan.Ultrafiltrasi emparan telah dimulakan (emparan disejukkan terlebih dahulu kepada 4 darjah).Selepas RPM emparan berbeza ditukar kepada g, ia berbeza.Pecutan emparan diselaraskan kepada minimum, mengurangkan tekanan pada membran.Ambil perhatian, pastikan anda meninggalkan emparan selepas emparan mencapai kelajuan destinasinya, atau jika anda menghadapi masalah, anda tidak boleh mengendalikannya buat kali pertama.Orientasi membran ke gelendong telah dilaraskan mengikut arahan (kes emparan sudut adalah membran ke paksi berserenjang).Dalam penggunaan praktikal, kelajuan putaran am adalah lebih rendah daripada yang terdapat dalam arahan, supaya hayat tiub emparan dapat dilanjutkan.
3) Kedua-dua jisim dan pusat graviti harus mencapai keseimbangan.Perhatikan kelajuan putaran dan pecutan tidak begitu pantas, jika tidak secara langsung merosakkan membran ultraturasan.Ultrafiltrasi emparan telah dimulakan (emparan disejukkan terlebih dahulu kepada 4 darjah).Selepas RPM emparan berbeza ditukar kepada g, ia berbeza.Pecutan emparan diselaraskan kepada minimum, mengurangkan tekanan pada membran.Ambil perhatian, pastikan anda meninggalkan emparan selepas emparan mencapai kelajuan destinasinya, atau jika anda menghadapi masalah, anda tidak boleh mengendalikannya buat kali pertama.Orientasi membran ke gelendong telah dilaraskan mengikut arahan (kes emparan sudut adalah membran ke paksi berserenjang).Dalam penggunaan praktikal, kelajuan putaran am adalah lebih rendah daripada yang terdapat dalam arahan, supaya hayat tiub emparan dapat dilanjutkan.
(4) Apabila tertumpu kepada baki 1ml, ambil 50ul larutan penimbal, tambahkan 10ul aliran melalui dan lihat jika terdapat sebarang warna biru, sebagai pertimbangan sama ada tiub ultraturasan tiada protein.Jika tiub bocor, tuangkan semula lapisan atas dan alir ke dalam tiub baharu untuk memulakan ultraturasan.Untuk menentukan dengan tepat jika tiub terlepas, sentrifuge selama 10 minit dengan 5mgml BSA sebelum mengalir, berjalan pada gam protein, atau ujian kasar Bradford, dan teruskan dengan menambah baki larutan protein pekat (yang beroperasi pada ais dan menghalang protein daripada dipanaskan) sehingga semua pekat telah ditambah.Berhati-hati semasa sentrifugasi jika pemendakan protein berlaku, yang membawa kepada penutupan tiub.Jika pemendakan berlaku, tentukan sama ada punca khusus pemendakan ialah kepekatan protein yang berlebihan atau penimbal yang tidak sesuai;Yang pertama boleh diselesaikan dengan ultraturasan berbilang tiub ultraturasan secara serentak, mengurangkan kepekatan, dan yang terakhir dengan menukar larutan penimbal yang berbeza sehingga tiada pemendakan protein berlaku.
(4) Apabila tertumpu kepada baki 1ml, ambil 50ul larutan penimbal, tambah 10ul aliran melalui dan lihat jika terdapat sebarang warna biru, sebagai pertimbangan sama ada tiub ultraturasan itu tiada protein.Jika tiub bocor, tuangkan semula lapisan atas dan alir ke dalam tiub baharu untuk memulakan ultraturasan.Untuk menentukan dengan tepat jika tiub terlepas, sentrifuge selama 10 minit dengan 5mgml BSA sebelum mengalir, berjalan pada gam protein, atau ujian kasar Bradford, dan teruskan dengan menambah baki larutan protein pekat (yang beroperasi pada ais dan menghalang protein daripada dipanaskan) sehingga semua pekat telah ditambah.Berhati-hati semasa sentrifugasi jika pemendakan protein berlaku, yang membawa kepada penutupan tiub.Jika pemendakan berlaku, tentukan sama ada punca khusus pemendakan ialah kepekatan protein yang berlebihan atau penimbal yang tidak sesuai;Yang pertama boleh diselesaikan dengan ultraturasan berbilang tiub ultraturasan secara serentak, mengurangkan kepekatan, dan yang terakhir dengan menukar larutan penimbal yang berbeza sehingga tiada pemendakan protein berlaku.
(5) Beberapa langkah pertama digunakan untuk menumpukan protein, dan jika penimbal hendak ditukar, perlahan-lahan tambah penimbal baru (penapisan ultra melalui membran ultraturasan 0.22um) kepada kira-kira 1ml jumlah protein, dan tumpukan semula kepada kira-kira 1ml selama tiga kali berturut-turut, dengan jumlah akhir pekat akhir bergantung pada kepekatan protein yang dikehendaki, secara amnya tidak lebih daripada 500ul, tetapi juga dalam 200ul.Capai 1000 × atau lebih pada tiga kali, pada asasnya sebanyak perubahan penimbal, seperti yang dikira dengan sekurang-kurangnya 10 × atau lebih pengayaan volum setiap kali.
(5) Beberapa langkah pertama digunakan untuk menumpukan protein, dan jika penimbal hendak ditukar, perlahan-lahan tambah penimbal baru (penapisan ultra melalui membran ultraturasan 0.22um) kepada kira-kira 1ml jumlah protein, dan tumpukan semula kepada kira-kira 1ml selama tiga kali berturut-turut, dengan jumlah akhir pekat akhir bergantung pada kepekatan protein yang dikehendaki, secara amnya tidak lebih daripada 500ul, tetapi juga dalam 200ul.Capai 1000 × atau lebih pada tiga kali, pada asasnya sebanyak perubahan penimbal, seperti yang dikira dengan sekurang-kurangnya 10 × atau lebih pengayaan volum setiap kali.
Masa siaran: Nov-09-2022